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ELISA試劑盒的是非特異性
更新時(shí)間:2016-07-05   點(diǎn)擊次數(shù):1245次

    因此含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕獲包被法,試驗(yàn)的特異性、敏感性均由此得以改善,重復(fù)性亦佳。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過(guò)物理吸附結(jié)合的,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用于。ELISA試劑盒可將聚苯乙烯板先經(jīng)紫外線照射(例如30W紫外燈,75cm照射12小時(shí)),以增加其吸附性能。例如,在檢測(cè)抗DNA抗體時(shí),需用DNA作為包被抗原,而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結(jié)合。換言之,包被即是抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面的過(guò)程。

    當(dāng)抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時(shí),抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露,在這種情況下,直接包被效果不佳,可以采用間接的捕獲包被法,即先將針對(duì)該抗原的特異抗體作預(yù)包被,其后通過(guò)抗原抗體反應(yīng)使抗原固相化。ELISA試劑盒也可用親和素生物素系統(tǒng)作間接包被,即用親和素先包被載體,然后加入生物素化的DNA,這種包被方法均勻、牢固,已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測(cè)定。
    IgG對(duì)聚苯乙烯等固相具有較強(qiáng)的吸附力,其聯(lián)結(jié)多發(fā)生在Fc段上,抗體結(jié)合點(diǎn)暴露于外,因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。間接包被的另一優(yōu)點(diǎn)是抗原用量少,ELISA試劑盒僅為直接包被的1/10乃至于/100,這種物理吸附,受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響,抗心磷脂抗體的ELISA試劑盒一般采用這種包被方式。固相載體先用堿性蛋白質(zhì),如聚賴(lài)氨酸、魚(yú)精蛋白等作預(yù)包被,也可提高核酸的結(jié)合力。

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